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布氏杆菌病的诊断与治疗

编辑:admin 2015-07-21 13:46

3.1 常用检测方法

3.1.1 虎红平板凝集试验(RBPT

blob.pngRBPT的抗原是将布鲁氏菌菌株(抗原性良好)经培养、灭活、离心后收集菌体用虎红染料染色后悬于乳酸缓冲液中制成,与被检血清在洁净的玻璃板上进行凝集反应,若出现沙粒状凝集者则判为阳性。

l  该方法操作简易、检测快速,成本低廉。目前,在国际贸易中用于牛、羊、猪布病检测,在我国也用于人布病监测的初筛。

l  但是准确性易受温度和凝集时间的影响,且抗原的标准化也可影响其敏感性,有时会因牛种布鲁氏菌S19弱毒疫苗免疫和交叉反应造成假阳性结果。对RBPT阳性患者,需要经过SAT(试管凝集试验)或其他血清学试验才能判定为阳性。

3.1.2 试管凝集试验(SAT

1897年莱特氏等(Wright)与其同事发现布病患者血清与马耳他细菌(羊型布氏杆菌)的培养物产生了凝集现象,遂称之为莱特氏凝集反应,成了迄今常用的血清学诊断方法之一。

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结果判读

++++  液体完全透明,菌体完全被凝集呈伞状沉于管底,振荡时沉淀物呈片状、块状或颗粒状(即100%凝集)

+++   液体稍混浊,菌体大部分被凝集于管底,振荡时沉淀物呈片状、块状或颗粒状(即75%凝集)

++    液体不甚透明,管底有明显的凝集沉淀,振荡时有块状或小片絮状物(即50%凝集)

+     液体透明不明显或不透明,有不甚明显的沉淀或仅有沉淀的痕迹(即25%凝集)

-液体不透明,管底无凝集或有一部分沉淀,但振荡时立即均匀散开

l  SAT可以定量,因而在判定反应强度上比虎红平板凝集试验更精确。1998年,我国将其列入国标作为诊断布病的正式法定试验并沿用至今。

l  但是该实验操作步骤繁琐,需37℃条件下孵育过夜,较费时,不适于现场检疫和基层采用。另外,SAT检测IgM敏感性较IgG高,主要用于人畜布病的早期诊断,但不适合绵羊种布病的诊断。单独应用会造成误诊和漏诊,因为不是所有感染动物所处的抗体水平都具有诊断意义。同RBPT一样,SAT也不能鉴别人工免疫和自然感染动物。

3.1.3 全乳环状试验(MRT

l  全乳环状试验(MRT)主要用于乳样(新鲜的全脂乳)的布病筛查,操作简单快速适合现场应用,但大规模监测时可靠性差,且对羊种布鲁氏菌敏感性低。

l  在检测牛初乳、干奶期接近的奶牛、发情旺盛期奶牛、乳房炎患牛、免疫疫苗后不到4个月的牛乳样时,均可能出现假阳性结果。

3.1.4补体结合试验(CFT

补体结合试验(complementfixationtestCFT)是用免疫溶血机制做指示系统,来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。试验由两个阶段组成:首先将经过56℃处理30分钟使补体灭活的抗血清,与抗原及补体混合使起反应。第二是加入已同抗绵羊红细胞抗体相结合的绵羊红细胞(致敏红细胞)。在最初阶段对消耗补体建立起足够的抗原抗体反应时,没有发生致敏红细胞的溶血,但补体剩余下来则引起溶血反应。

l  相比SATRBPT,特异性和敏感性较高,具有较高的临床诊断价值。

l  但是试验操作复杂,检测所用的溶血素制备困难,CFT在操作过程中对专业人员添加试剂的量、试验温度及设备具有较高要求,故很难广泛应用于临床检测中。

3.1.5酶联免疫吸附试验(ELISA

blob.pngELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。通常有竞争法和间接法两种模式。

l  ELISA不仅可以应用于血清抗体的检测,还可应用于乳样中抗体的检测。

l  ELISA的敏感性比SATCFT高。

l  虽然cELISA可以减弱革兰氏阴性菌感染引起的假阳性,但也不能对粗糙型的布鲁氏菌感染进行准确的诊断, iELISA甚至不能解决布鲁氏菌与其他阴性菌感染引起的交叉反应的问题。

l  假阳性高

l  操作需专业人员进行培训。

l  借助仪器,所需时间长,步骤较多,不适合基层现场检测。

l  ELISA的检测效果关键在于抗原的选择,目前所用的抗原主要是SLPS 。抗原决定位点主要集中在LPSO链,而粗糙型布鲁氏菌表面缺少LPSO链,故基于LPSO链的检测方法无法准确诊断粗糙型布鲁氏菌感染引起的疾病。

3.1.6荧光偏振分析技术(FPA

将荧光素标记的分子量小于50kD的小分子抗原加入到待检血清或其他的液体中检测抗体,如果存在特异性抗体,则会结合到标记抗原上使分子的随机旋转速率下降,下降的程度可以用荧光偏振分析仪检测出来。

布鲁氏菌病的FPA诊断抗原是用FITC标记的平均分子量为22kD的牛种布鲁氏菌S1119-3S-LPSO链,将抗原加入到血清或全血中检测抗体的含量,反应结束后用荧光偏振检测仪检测结果。

l  FPA用于布鲁氏菌病的检测敏感性和特异性良好。

l  荧光易猝灭。

l  另外需要大型仪器,无法大规模普及使用。

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3.1.7染色镜检

采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织,制成抹片,用柯兹罗夫斯基染色法染色,镜检,布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌,而其它菌为蓝色。

该方法常应用于对流产物质的分析,但不具有特异性,因为一些导致流产的病原体如流产衣原体以及贝氏立克次氏体也能够被染成红色。

另外,取样较困难,对操作人员危害较大。blob.png

3.1.8 分离培养

blob.png布鲁氏菌可以用胰蛋白胨琼脂、血液琼脂、肝汤琼脂等培养基进行分离培养,通过菌体形态、染色特征、菌落形态、生长特性、生化反应特点以及布鲁氏菌多克隆抗体凝集试验等方法进行鉴定。

布鲁氏菌的分离培养是诊断布鲁氏菌病的“金标准”,但是由于布鲁氏菌的分离率较低、所需时间较长(至少3~8天,有时甚至达45天)、生物安全要求较高,因此不适合普遍应用。

3.1.9分子生物学检测-PCR技术

在体外,有目的性地将受检病原体较保守基因扩增出来,用以证明该病原体的存在。

l  灵敏度特异性好

l  整体操作体系技术要求较高:如核酸的提取、引物的设计、核酸扩增……一般检验机构难以开展,需要仪器,价格昂贵,目前只是处于研究阶段。blob.png

3.2 布氏杆菌病的治疗

布鲁氏菌病因症状复杂,治疗方法一直存在争议。目前多采用抗菌疗法,一般联合2种抗菌药,连用2-3个疗程。至少要有 1种药能够透过细胞壁进人细胞内,并且要延长药物作用时间。

常用抗生素有链霉素、四环素类药物、磺胺类及TMP,另外强力霉素、利福平、氨苄青霉素也广泛应用。单纯的抗菌疗法效果不理想,容易复发,应以药物为主。佐以支持疗法,以提高抵抗力。










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